马改玲，吴博通，刘孟孟，张俊涛
（1.登封市人民医院病理科，河南 登封 452470；
2.登封市人民医院肿瘤科，河南 登封 452470）
肺癌是一种高发病率和高死亡率的恶性肿瘤，据报道是中国死亡率最高的癌症，其中非小细胞肺癌（Non-small-cell lung cancer，NSCLC）几乎占所有肺癌病例的85%， 大部分患者在确诊时已处于晚期[1]。
化疗是这些患者的主要治疗选择之一，尽管广泛使用化学疗法， 例如铂类药物， 晚期NSCLC 患者的预后仍然很差，5 年生存率始终低于15%[2-3]。
AURKA 是一种细胞周期调节激酶，参与中心体成熟、有丝分裂进入、双极纺锤体组装和染色体分离，在许多癌症类型中经常有报道AURKA表达升高[4]。
AURKA 单独或与其他因素联合可引发细胞恶性转化并促进癌细胞的恶性表型[5]。
AURKA 通过调节多种致癌和抑癌蛋白显示致癌活性：AURKA 在Ser215 和Ser315 处对磷蛋白p53肿瘤抑制蛋白（Tumor protein p53，TP53）的磷酸化分别通过鼠双微体2 基因（Murine doubleminute 2，MDM2）介导的泛素化和TP53DNA 结合/反式激活活性的消除导致TP53 降解[6]。反过来，TP53 下调会增加ARUKA 在转录和翻译后水平的表达[7]。
AURKA 和TP53 之间的负反馈调节极大地促进了致癌作用和进展。较低的AURKA 表达会提高对化疗（如紫杉醇或多西他赛）的敏感性，并降低对铂的耐药性[8]。
相比之下，AURKA 的过度表达可以降低顺铂敏感性和对抗微管药物的抵抗力[9]。
目前，尚未见关于AURKA 表达对晚期NSCLC 患者铂类化疗疗效及预后作用的研究报道。
本研究拟评估AURKA 表达与晚期NSCLC 患者铂类化疗反应和预后的关系，为晚期NSCLC 的治疗提供依据。
1.1 临床资料 将2016 年1 月至2018 年6 月登封市人民医院90 名经组织学证实为晚期NSCLC的患者纳入研究。
所有活检样本均通过支气管镜或细针抽吸活检收集。
所有患者均在本院肿瘤科接受了铂类联合化疗。
5 年内有其他恶性肿瘤病史、怀孕或哺乳期、严重感染或器官功能受损者除外。获取组织后作石蜡切片以及IHC 染色切片。所有患者在纳入研究前均签署知情同意书， 该研究获得本院医院伦理委员会的批准。
所有患者均接受铂类化疗作为一线化疗，如吉西他滨、 长春瑞滨或紫杉醇。
在第1 天和第8天， 静脉给药剂量为75 mg/m2顺铂、1 000 mg/m2卡铂和吉西他滨和25 mg/m2长春瑞滨， 最多4 个周期， 暂停治疗直至疾病进展或出现不可接受的毒性。
如果患者出现三级非血液学毒性、四级血液学毒性、发热性中性粒细胞减少或感染，则下一个周期的化疗药物剂量减少25%。
化疗结束后，每月对患者进行电话随访，直至死亡或研究结束。
通过使用实体瘤反应评估标准（RECIST）对化疗反应进行分类：分为完全缓解（Complete remission，CR）、部分缓解（Partial remission，PR）、疾病稳定（Stable disease，SD） 以及疾病进展 （Disease progression，PD），有效＝CR＋PR，无效＝SD＋PD。
1.2 免疫组化法测定AURKA 表达及判定标准 本研究使用从手术切除中获得的福尔马林固定石蜡包埋(FFPE)组织的4 μm 厚切片。
将切片固定在载玻片上， 然后与抗AURKA 的抗兔单克隆抗体（Abcam，Cambridge，UK） 一起孵育， 使用Bench Mark XT（Ventana Automated Systems，Inc，Tucson，AZ，USA）进行免疫组织化学分析。使用Ventana 的CC1 修复溶液对每张载玻片进行热处理30 min，然后与AURKA 抗体一起孵育30 分钟。
该自动化系统使用以3,3"-二氨基联苯胺(DAB)作为色原的Ultra VIE WDAB 检测试剂盒 （Ventana 自动化系统）。
评分是包括阳性染色肿瘤细胞的比例和染色强度。癌细胞百分比评分如下：阳性癌细胞<10%的切片评分为0；
阳性癌细胞10%~50% 的评分为1；
阳性癌细胞50%~75% 的评分为2；
且＞阳性癌细胞75%的评分为3。
同时，根据染色强度将组织分为四个等级：0 表示无染色；
1 表示染色较弱（浅黄色），2 表示中度染色 （黄褐色），3 表示强染色（棕色）。
染色指数（0~9）计算为阳性癌细胞比例乘以染色强度评分的乘积。
最佳截断值定义如下：染色评分> 6 被认为具有阳性AURKA 表达，染色评分为≤6 表明阴性AURKA 表达。
1.3 统计分析 使用统计软件包SPSS 21.0（IBM）进行数据处理，分类变量以百分比(%)描述，并使用χ2检验分析，采用多因素Logistics回归分析探讨晚期非小细胞肺癌患者化疗疗效相关因素， 多因素Cox回归分析晚期非小细胞肺癌患者总体预后相关因素，P<0.05 为差异有统计学意义。
2.1 晚期非小细胞肺癌组与癌旁组AURKA 蛋白表达比较 AURKA 呈黄色或深棕黄色颗粒， 定于细胞核，晚期非小细胞肺癌组AURKA 蛋白表达阳性率高于癌旁组（P<0.05）。
见表1。
图1 晚期非小细胞肺癌组与癌旁组AURKA 蛋白表达（HE 染色，400x）
表1 晚期非小细胞肺癌组与癌旁组AURKA 蛋白表达比较［n（%）］
2.2 晚期NSCLC 患者临床病理特征与化疗疗效的关系 晚期NSCLC 患者化疗疗效与年龄、 性别不相关（P>0.05）；
与肿瘤最大径、TNM 分期、浸润深度、AURKA 表达、病理级别、淋巴结转移、复发相关性明显， 且肿瘤最大径大于或等于5 cm、TNM分期高、浸润深度深、AURKA 表达阳性、病理级别低、有淋巴结转移、有复发，晚期NSCLC 患者化疗无效率高（P<0.05）。
见表2。
表2 晚期NSCLC 患者临床病理特征与化疗疗效的关系［n（%）］
2.3 晚期NSCLC 患者化疗疗效影响因素多因素Logistics回归分析 以化疗疗效为因变量（0=有效，1=无效），表2 单因素分析有意见的变量进行多因素Logistics回归分析， 结果显示，TNM 分期Ⅳ期、病理级别低、AURKA 表达阳性是影响晚期NSCLC患者化疗疗效的危险因素（P<0.05）。
见表3。
表3 晚期NSCLC 患者化疗疗效多因素Logistics 回归分析
2.4 晚期NSCLC 患者预后生存情况 本研究90例晚期NSCLC 患者中， 自出院后至随访结束存活4～60 个月，2 年生存率为58.9%（58/102）；
其中AURKA 阳性和阴性患者2 年总生存率分别为40/72（55.6%）和18/18（100.0%）；
AURKA 阳性的晚期NSCLC 患者2 年生存率相较于阴性患者显著下降，差异有统计学意义（P＜0.05）。
2.5 影响晚期NSCLC 患者预后单因素分析 经单因素分析得出：
肿瘤最大径≥5 cm、TNM 分期Ⅳ、浸润深度≥6 cm、 有淋巴血管间隙浸润、 化疗无效、病理级别低、有复发、AURKA 阳性的晚期非小细胞肺癌患者2 年生存率均显著缩短（P＜0.05），见表4。
表4 影响晚期NSCLC 患者预后的单因素分析
表5 晚期NSCLC 患者总体预后影响因素的多因素Cox 回归分析
2.6 晚期NSCLC 患者总体预后影响因素的多因素Cox回归分析 以晚期NSCLC 患者总体预后为因变量（1=死亡，0=生存），以表4 单因素分析有意义变量为自变量进行多因素Cox回归分析， 结果显示：化疗无效、TNM 分期Ⅳ期、AURKA 表达阳性是影响晚期非小细胞肺癌患者预后的独立危险因素（P<0.05）。
多项临床研究评估了AURKA 在18 种肿瘤组织和匹配的正常组织中的表达，结果表明，与正常组织相比，AURKA 在大多数测试的癌症类型中表达上调[10]。
临床研究表明，较高的AURKA 与大多数癌症类型（结肠癌、肝癌、前列腺癌）的预后不良相关。一项研究评估了结直肠癌患者中AURKA 的预后作用，尽管缺乏统计学意义，但其结果仍然提示AURKA 可能对生存有积极影响，并强调有必要研究AURKA 对治疗反应的影响，该研究的进一步体外细胞试验研究表明[11]，转录因子的甲基化不足和上调可能至少部分导致结肠癌中AURKA 的表达升高。
一些研究表明，基因扩增是AURKA 升高的另一个原因[12]。通过反式激活DNA 损伤反应(DDR)基因来维持基因组稳定性是AURKA 依赖性肿瘤促进的关键介质；
因此，AURKA 过表达会导致各种DDR 机制的丧失，从而促进基因组不稳定性和癌症的发展[13]。
本研究结果显示：晚期非小细胞肺癌组AURKA 蛋白表达阳性率高于癌旁组，AURKA 阳性的晚期NSCLC 患者2 年生存率均显著缩短，AURKA 表达阳性是影响晚期NSCLC 患者预后的独立危险因素。
这说明，AURKA 在晚期NSCLC 过表达，AURKA 表达阳性是影响晚期NSCLC 患者预后的独立危险因素。
近期研究发现，铂诱导的DNA 损伤可触发DNA 损伤修复（DDR）， 这是对铂产生化学抗性的主要因素，而AURKA 能促发DDR， 此外癌症中上调的AURKA可能促进癌症进展，这可能是AURKA 阳性的晚期NSCLC 患者2 年生存率均显著缩短的原因。
DNA 是许多抗癌药物的分子靶点。
修复DNA的异常能力与化疗耐药密切相关， 这可能极大地影响化疗的有效性。
为了提高化疗的疗效并降低其毒性， 根据化疗相关基因的表达水平或多态性来定制化疗，AURKA 是一个位于染色体片段17q12-21 的100kb 区域，在修复双链DNA 断裂和顺铂耐药介导的DNA 损伤中起着重要作用[14]。
先前的研究报道，在AURKAmRNA 表达的最高三分位数与对辅助化疗的反应增加之间发现了显著的相关性[15]。
AURKA 低表达与对顺铂和依托泊苷更好的敏感性相关；
此外AURKA 低表达与抗微管药物有关，如紫杉醇、多西他赛和长春瑞滨[16]。研究报道，根据AURKA 表达的差异，当专门使用吉西他滨时， 可以大大提高其疗效。
目前的研究支持AURKA 通过促进基因组不稳定性参与结肠癌变，增加的AURKA 为基于DNA 损伤诱导药物的化疗抗性提供依据[17]。已经在不同的癌症类型中研究了AURKA 对化学敏感性的影响。
到目前为止，其结论一致，AURKA 损害了化学敏感性[18]。本研究结果发现， 晚期NSCLC 患者化疗疗效与肿瘤最大径、TNM 分期、浸润深度、AURKA 表达、病理级别、淋巴结转移、复发相关性明显，且肿瘤最大径≥5 cm、TNM 分期越高、浸润深度越深、AURKA 表达阳性、病理级别低、有淋巴结转移、有复发，晚期非小细胞肺癌化疗无效率越高（P<0.05）。
TNM 分期Ⅳ期、病理级别低、AURKA 表达阳性是影响NSCLC 患者化疗疗效的独立危险因素 （P<0.05）。
这提示，AURKA 高表达的NSCLC 患者在接受铂类化疗时表现出更差的反应和更短的进展时间。
体外细胞实验表明[19]，抑制AURKA 可增强癌细胞对紫杉烷和紫杉醇、顺铂、多柔比星和5-氟尿嘧啶(5-Fu 的化学敏感性；
而AURKA 在各种癌症中抑制铂化学敏感性，包括卵巢癌、肝细胞癌、髓母细胞瘤、急性髓系白血病以及头颈癌。
细胞机制研究发现[20]，在癌细胞亚群中，AURKA 沉默通过上调抗凋亡因子使结直肠癌干细胞(CR-CSC)对奥沙利铂的反应敏感增强。本研究未探讨AURKA 对晚期非小细胞肺癌化疗敏感性抑制的机制，这将在后续研究中进行。
综上所述，晚期非小细胞肺癌组织中AURKA表达水平升高；
高水平的AURKA 是晚期非小细胞肺癌患者含铂化疗不敏感及预后不良的危险因素。
